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淋巴細(xì)胞分離液的原理及使用注意事項
更新時間:2020-10-28瀏覽:3463次
淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑??捎糜隗w外分離外周淋巴血細(xì)胞,也可以從其他來源中分離單核細(xì)胞,包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞,適用于從血液及組織勻漿中分離所需細(xì)胞,在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用。其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液。
 
淋巴細(xì)胞分離液的原理:
 
外周血中單個核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同.淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。
 
淋巴細(xì)胞分離液使用時需要注意:
 
1.在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度,在高溫時呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液復(fù)溫至18-22℃。為獲得理想的實驗結(jié)果,在取血后2小時內(nèi)進(jìn)行實驗,血液提取后存放時間越長細(xì)胞活性越低。
2.實驗過程中,如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,大大降低細(xì)胞得率及純度。
3.抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素,其他抗凝劑也可使用,但會影響細(xì)胞活性。應(yīng)注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。
4.實驗操作時,不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體,手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會激活淋巴細(xì)胞從而降低細(xì)胞得率及活性。
5.不可使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
6.吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。吸取過多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
7.如需進(jìn)行B、T細(xì)胞計數(shù),則需血液貯藏時間不得多于10小時,否則將導(dǎo)致細(xì)胞被激活,得率降低。
8.為去除所混雜的血小板,可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。
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